周玉姐是大同府伊周彦亨之女。周彦亨因上书反对刘瑾徵用军马取悦皇帝，被刘瑾害死。周家被查封，周妻谭淑贞被藉入乐府，周玉姐之弟周金宝去向不明。为了寻找母亲，周玉姐冒险自入乐府见到母亲。谭氏叮嘱女儿去河南投奔罢职的阁老刘健，并希望她能找到弟弟。末了，谭氏悬樑自尽。亲历了这场变故和灾难，又目睹了父亲大义凛然的周玉姐，决心为父申冤。为躲避刘瑾的追杀，玉姐四处奔波，历尽磨难，但还是被发现并下大狱。在正义之士韩士奇的帮助下，正德皇帝终于放出苏三。苏三随为她赎身的申鸿兄弟回到洪洞，谁料一场新的更大的灾难正等着她。她被人诬陷定成死罪， 在大家的帮助下玉姐疑案得以洗脱。宁王叛乱，使得刘瑾的罪行败露，皇帝下旨将其凌迟处死。玉姐及其父的冤屈得以昭雪。